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液相色譜柱簡介和柱長及內(nèi)徑的選擇

發(fā)布時間:2022-05-20

  色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,對色譜柱的要求是柱效高,選擇性好,分析速度快等,市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,氧化鋁,有機聚合物微球(包括離子交換樹脂),多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10um等,柱效理論值可達5~16萬/米。

  對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效,對于同系物分析,只要500即可,對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,因此一般色譜柱10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

  柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達到最佳效率,除柱外死體積要小外,也要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。

  即使最好的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng),這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度,在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響色譜柱遠遠大于管壁效應(yīng)。

  柱長及內(nèi)徑的選擇:。

  長度的選擇:柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長,250—300mm是最普遍的柱長,實驗室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,一般用來分離l0到50個組份的中等至復(fù)雜混合物,500—600mm,要求較高分辨率的應(yīng)用,—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。

  內(nèi)徑:柱效率與柱半徑平方成反比,內(nèi)徑越小柱效越高,但內(nèi)徑越大,柱容量也增加,允許進樣量就越多,色譜柱當(dāng)進樣量超過柱容量時,則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡,將會導(dǎo)致色譜蜂畸變,柱分辨率降低,重現(xiàn)性不好,因此對于復(fù)雜樣品需要精確分離,必須使用小內(nèi)徑柱子,另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子,目前實驗室使用最常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。

  一般選擇原則:分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱,對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。

  廣州研創(chuàng)是國內(nèi)專業(yè)的手性色譜柱,手性色譜填料研發(fā)及生產(chǎn)廠家,是手性分離材料與手性色譜柱領(lǐng)域?qū)I(yè)化運營的中國品牌,廣州研創(chuàng)生物可提供手性藥物分離純化及工業(yè)制備的一體化解決方案,包括手性分析方法開發(fā)及手性制備分離制備服務(wù)等,http://barnithebus.com/。


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